Długa synteza peptydów (do 189 aminokwasów)

Synteza długich peptydów|Dostosowywanie peptydów o długim łańcuchu|Trudna synteza peptydów|Peptydy powyżej 50mer|Nauka-Peptyd

Potrzebujesz długiego peptydu zawierającego ponad 50 aminokwasów? Science-Usługa syntezy długich peptydów firmy Peptide obejmuje 50–189 aminokwasów, ze strategią syntezy segmentowej, przezwyciężeniem problemów agregacji hydrofobowej i niską wydajnością syntezy, itp.. 20 lat doświadczenia i stabilnego dostarczania. Zapraszamy do kontaktu z nami.

Dlaczego długie peptydy są trudne do wytworzenia?
Każdy, kto zajmował się syntezą peptydów, wie, że problem pojawia się, gdy łańcuch peptydowy jest długi: w granicach 20 aminokwasów większość firm jest w stanie to zrobić. Jeśli chodzi o więcej niż 40 aminokwasów, zaczynamy dobierać sekwencję. Przy 60 aminokwasach i więcej liczba firm, które mogą przejąć, zmniejsza się o połowę. Jeśli chodzi o ponad 100 aminokwasów, niewiele jest firm, które odważą się to zrobić.

 

Dlaczego? Ponieważ synteza długich peptydów napotyka kilka pułapek:

Wydajność syntezy maleje: przy każdym przedłużeniu aminokwasu wydajność będzie zmniejszana o jeden. 30 peptyd aminokwasowy, każdy etap z wydajnością 99%, ostateczna wydajność nadal wynosi 74%; 60 aminokwasów, każdy etap to nadal 99%, ostateczna wydajność to tylko 55%. W rzeczywistości wydajność wielu etapów nie może osiągnąć 99%.
Agregacja hydrofobowa: Kiedy w długim peptydzie znajduje się dużo aminokwasów hydrofobowych, łańcuch peptydowy zaczyna „zlepiać się” na żywicy, a aminokwasy znajdujące się za nim nie mogą przedostać się do środka.

Trudność w oczyszczaniu: czas retencji długich peptydów i zanieczyszczeń jest zbyt blisko siebie, aby można było uzyskać czyste cięcie.
Słaba rozpuszczalność: Po otrzymaniu peptydu nie można go rozpuścić, więc nie można przeprowadzić eksperymentu.
Byliśmy już w takich dziurach i wiemy, jak je ominąć.

1. Długość: 50-189 aminokwasów

2. Strategia syntezy segmentowej
Najskuteczniejszym sposobem radzenia sobie z długimi peptydami jest ich segmentacja:
Wybór segmentu: Pociąć długi peptyd na 2-4 segmenty po 30-60 aminokwasów każdy. Punkt odcięcia powinien znajdować się w miejscu, w którym trudność syntezy jest niewielka, na przykład unikając ciągłego obszaru hydrofobowego.
Synteza fragmentów: każdy fragment jest syntetyzowany i oczyszczany indywidualnie do wystarczająco wysokiej czystości.
Łączenie fragmentów: łączenie fragmentów w roztworze lub na żywicy. Metoda łączenia może być naturalna, chemiczna lub enzymatyczna.
Składanie: Jeśli peptyd ma wiązanie dwusiarczkowe, po splocie należy go złożyć do prawidłowej konformacji.

3. Czystość: w zależności od wymagań eksperymentalnych

Każdemu długiemu peptydowi towarzyszy raport HPLC i MS, dzięki czemu dane dotyczące czystości są przejrzyste.

4. Modyfikacje: długie peptydy mogą również dodawać funkcje
Etykietowanie fluorescencyjne: FITC, TAMRA, chcą zobaczyć, dokąd biegnie długi peptyd.
Biotyna: pociągnij-lub przetestuj.
Znakowanie izotopów: do oznaczania ilościowego NMR lub spektrometrii mas.
Fosforylacja/glikozylacja: naśladowanie modyfikacji po-translacyjnych.

1. Robimy to od 20 lat
Synteza długich peptydów nie jest czymś, co każdy może zrobić. Przez lata zajmowaliśmy się wieloma długimi peptydami: transbłonowymi fragmentami białek, wirusowymi peptydami fuzyjnymi, białkami amyloidowymi, peptydami przeciwdrobnoustrojowymi itp. Mamy dobre pojęcie, które sekwencje łatwo się agregują i w jakich warunkach można je uratować. Jeśli przychodzisz do nas na Syntezę Długich Peptydów to przynajmniej nie musisz od początku stawać na dołku.

2. Synteza frakcyjna: nie tylko cięcie na kawałki
Segmentacja wydaje się prosta, ale ważne jest, gdzie wyciąć, jak długi jest każdy segment i jak je połączyć. Mamy kilka zasad:
Przetnij strefę hydrofilową: Unikaj przecinania rdzenia hydrofobowego, w przeciwnym razie segmenty same się zbiegną.
Zrównoważ długość fragmentów: nie czyń jednego segmentu szczególnie trudnym do wykonania, a innych szczególnie łatwym. 3.
Wybór punktu połączenia: Naturalne połączenia chemiczne wymagają tioestru na końcu C- i Cys na końcu N-, co należy wcześniej zaplanować.

3. Peptydy hydrofobowe: specjalny układ rozpuszczalników.
Niektóre długie peptydy są tak hydrofobowe, że nie można ich rozpuścić za pomocą konwencjonalnych rozpuszczalników, dlatego podczas syntezy będą zlepiać się na żywicy. Posiadamy specjalny system rozpuszczalników i dodatków, które utrzymują rozciąganie łańcucha peptydowego podczas procesu syntezy, dzięki czemu mogą przedostać się następujące aminokwasy.

4. Kontrola jakości: dane na każdym kroku
Kontrola jakości długich peptydów jest bardziej złożona niż w przypadku krótkich peptydów:
Kontrola jakości półproduktów: po zsyntetyzowaniu każdego fragmentu należy najpierw zmierzyć czystość i masę cząsteczkową, a następnie po przejściu testu przejść do kolejnego etapu.
Monitorowanie procesu łączenia: Wypróbuj reakcję połączenia i zmierz MS, aby zobaczyć wydajność połączenia.
Kontrola produktu końcowego: HPLC pod kątem czystości, MS pod kątem masy cząsteczkowej, MS/MS pod kątem poprawności sekwencji (opcjonalnie).
Test rozpuszczalności: Podaj zalecane rozpuszczalniki i metody solubilizacji, aby nie otrzymać peptydów, które się nie rozpuszczają.
Dane mówią same za siebie, a każdy krok można prześledzić w przypadku syntezy długich peptydów.

5. Od miligramów do stu miligramów, aż do końca
Miligramy na fazę przesiewową, dziesięć miligramów na fazę walidacji, sto miligramów na badanie strukturalne -, możemy wziąć to wszystko. Ten sam projekt, ten sam odpowiednik, nie ma potrzeby ponownej-harmonizacji.

• Dostawa: Liofilizowany proszek, probówki wirówkowe lub fiolki, zabezpieczone azotem.
• Dokumenty towarzyszące: COA (profil HPLC + profil MS), MS/MS (opcjonalnie potwierdzenie sekwencji), raport syntezy (proces segmentacji i splicingu).
• Badania opcjonalne: zawartość peptydów, endotoksyny, wilgotność, skład aminokwasowy, test rozpuszczalności.
• Indywidualne opakowanie: porcjowanie i znakowanie zgodnie z Twoimi wymaganiami.
• Przed wysłaniem każdy produkt syntezy długich peptydów jest dwukrotnie-sprawdzany w celu zapewnienia, że ​​sekwencja jest prawidłowa, a czystość odpowiada standardom.

Niezależnie od tego, czy potrzebujesz peptydu transbłonowego o wielkości 80 aminokwasów, czy białka wirusowego o wielkości 150 aminokwasów, możesz z nami porozmawiać. Jeśli poprosisz Science-Peptide o wykonanie długiej syntezy peptydów, przynajmniej nie będziesz musiał próbować pojedynczo.

Musisz mi powiedzieć:
Sekwencja peptydowa (lub informacja o celu)
Ile (miligramy)
wymagania czystości
nie mają wiązań dwusiarczkowych ani innych modyfikacji

Kiedy tego chcesz?

W ciągu 24 godzin otrzymasz ocenę wykonalności i wycenę.